Методи дотримання біологічної безпеки в лабораторних умовах

Безпечна робота зі зразками в лабораторії
Неправильні збір, транспортування та поводження з зразками в лабораторії пов'язані з ризиком інфікування людини, яка цим займається.

Контейнери для зразків
Контейнери для зразків можуть бути скляними, але бажано, щоб вони були пластмасовими. Вони повинні бути міцними і не мати протікання при правильно встановленої кришці. Жоден матеріал не повинен залишатися на зовнішній поверхні контейнера. Контейнер повинен бути належним чином позначений для полегшення ідентифікації. Запит на зразок або специфікації форми не повинні обертатися навколо контейнерів; їх слід помістити в окремі, переважно водонепроникні конверти.

Транспортування зразків всередині установи
Для запобігання випадкової витоку або проливання слід використовувати вторинний контейнер, наприклад ящик з підставками, з тим щоб контейнери не могли перекинутися. Вторинний контейнер може бути металевим або пластмасовим, не портящимся в автоклаві і резистентним до дії хімічних дезінфікуючих засобів. Бажано, щоб між кришкою і корпусом була ущільнювальна прокладка. Такі контейнери слід регулярно деконтаминировать.

Отримання зразків
Лабораторії, які отримують велику кількість зразків, повинні виділити спеціальне приміщення або місце для цієї мети.

Відкриття упаковки
Персонал, який отримує і розпаковує зразки, повинен бути ознайомлений з пов'язаними з цим небезпеками і пройти спеціальну підготовку за стандартним заходів обережності (2), особливо щодо розбилися або протікають контейнерів. Первинні контейнери зі зразками повинні відкриватися в боксі біологічної безпеки. Повинні бути в наявності дезінфікуючі засоби.

Використання піпеток і пипетирующих коштів
1. Пипетирующие засоби повинні використовуватися завжди. Пипетирование ротом повинно бути заборонено.
2. Піпетки повинні мати ватні пробки, щоб зменшити контамінацію пипетирующих коштів.
3. Ніколи не слід продувати повітря через рідину, що містить інфекційні агенти.
4. Інфекційні матеріали не слід змішувати поперемінним всмоктуванням і зливом через піпетку.
5. Не можна форсувати злив рідини з піпеток.
6. Переважно використовувати піпетки з двома крайніми відмітками, так як вони не вимагають зливу останньої краплі.
7. Контаміновані піпетки слід повністю занурити у відповідний дезінфікуючий засіб, що міститься в небьющемся контейнері. Перш ніж видалити, їх слід залишити на досить тривалий час в дезінфікуючому засобі.
8. Контейнер для видалення піпеток повинен бути поміщений всередину боксу біологічної безпеки, а не за його межами.
9. Шприци з голками для підшкірних ін'єкцій не повинні використовуватися для пипетирования.
10. Слід використовувати спеціальні пристрої для відкривання флаконів з мембранними кришками, які дозволяють використовувати піпетки і уникати необхідності використовувати шприци з голками для підшкірних ін'єкцій.
11. Для того, щоб уникнути розбризкування впали з піпетки крапель інфекційного матеріалу, слід покласти абсорбуючий матеріал на робочу поверхню; після використання такої матеріал слід видаляти інфекційні відходи.

Запобігання поширенню інфекційних матеріалів
1. Щоб уникнути передчасної втрати свого вантажу, мікробіологічні петлі для пересіву повинні мати діаметр 2-3 мм і не мати розриву. Для зведення до мінімуму вібрації довжина плеча повинна бути не більше 6 див.
2. Щоб уникнути небезпеки розбризкування інфекційного матеріалу у відкритому полум'ї бунзеновський пальники для стерилізації петель для пересіву слід використовувати закритий електричний микросжигатель. Краще користуватися одноразовими петлями для пересіву, які не потребують стерилізації.
3. Слід проявляти обережність при сушінні зразків мокротиння, щоб уникнути утворення аерозолів.
4. Відпрацьовані зразки та культури для автоклавування та/або видалення поміщаються в непроникні контейнери, наприклад, лабораторні сміттєві мішки. Перш ніж викидати такі мішки, слід ретельно перев'язати їх, наприклад «автоклавної» стрічкою.
5. В кінці кожного періоду роботи робочі зони слід деконтаминировать відповідним дезинфікуючим засобом.

Використання боксів біологічної безпеки
1. Правила та обмеження використання боксів повинні бути пояснені всім потенційним користувачам з посиланням на національні стандарти та відповідну літературу. Персоналу необхідно роздати письмові протоколи або керівництва з безпеки або експлуатації. Зокрема, персонал повинен чітко розуміти, що бокс не захищає від проливання, бою посуду чи поганих методів роботи.
2. Бокс можна використовувати тільки за умови, що він знаходиться в справному
стані.
3. Скляну оглядовий панель не можна відкривати під час використання боксу.
4. Слід тримати мінімум апаратури і матеріалів у боксі. Не можна перекривати циркуляцію повітря біля заднього відсіку.
5. В боксі можна використовувати бунзеновские пальника. Виділяється ними тепло може порушити повітряний потік і пошкодити фільтри. Допускається використання електричного микросжигателя, але краще користуватися стерильними одноразовими петлями для пересіву.
6. Усі роботи повинні проводитися на середній або задній частині робочої поверхні і повинні бути видимими через оглядовий панель.
7. Слід звести до мінімуму переміщення позаду оператора.
8. Операторові не слід порушувати повітряний потік, неодноразово виймаючи і знову вводячи руки в бокс.
9. Ні одна решітка не повинна блокуватися записами, піпетками чи іншими матеріалами, так як це порушує повітряний потік і може викликати контамінацію матеріалу і оператора.
10. Поверхня боксу біологічної безпеки слід протирати належним дезинфікуючим засобом по завершенні роботи і в кінці дня.
11. Вентилятор боксу повинен працювати, принаймні, протягом 5 хвилин до початку роботи і після завершення роботи в боксі.
12. Документи ніколи не слід поміщати всередину боксів біологічної безпеки.

Запобігання попадання інфекційних матеріалів
в організм і контакту зі шкірою та очима
1. Великі частинки і краплі (діаметром >5 мкм), що утворюються під час мікробіологічних маніпуляцій, швидко осідають на плоскі поверхні і руки оператора. Для цього слід надягати рукавички одноразового використання. Працює в лабораторії слід уникати доторкання руками до рота, очей і обличчя.
2. Продукти і напої не слід вживати або зберігати в лабораторії.
3. В лабораторії не слід брати в рот ніякі предмети – ручки, олівці, жувальну гумку.
4. В лабораторії не можна користуватися косметикою.
5. Обличчя, очі і рот повинні бути закриті екраном або іншим чином захищені під час будь-якої операції, яка може призвести до утворення бризок потенційно інфекційних матеріалів.

Запобігання ін'єкції інфекційних матеріалів
1. Випадкової інокуляції в результаті травми, нанесеної розбитою або тріснутою скляним посудом, можна уникнути шляхом ретельного дотримання правильної практики і процедур. Скляний посуд, по можливості, слід замінити на пластмасову.
2. Випадкове інфікування може відбутися в результаті травми від уколу, наприклад голками для підшкірного введення (стрижневими голками), скляними пастеровскими піпетками або розбитим склом.
3. Випадки травматизму від стрижневих голок можна скоротити через: (а) зведення до мінімуму використання шприців і голок (наприклад, для відкривання флаконів і пляшок з мембранними кришками є прості пристосування, в результаті чого замість шприців і голок можна використовувати піпетки); або
(b) використання — якщо шприци та голки все ж необхідні — спеціальних пристроїв для запобігання від уколу.
4. Голки ніколи не слід закривати ковпачками. Предмети одноразового користування слід викидати у стійкі до проколювання міцні контейнери з кришками.
5. Скляні піпетки слід замінити пластмасовими пастеровскими піпетками.

Сепарування сироватки
1. Цю роботу можуть виконувати тільки підготовлені співробітники.
2. Слід надіти рукавички, щоб захистити очі та слизові оболонки.
3. Бризок та аерозолів можна уникнути або звести їх до мінімуму за допомогою правильних методів лабораторної роботи. Кров і сироватку слід акуратно пипетировать, але не зливати. Пипетирование ротом має бути суворо заборонено.
4. Після використання піпеток їх потрібно повністю занурити у відповідний дезінфікуючий речовина. Вони повинні залишатися зануреними в це речовина протягом потрібного часу, після чого їх можна викинути або помити і простерилізувати для повторного використання.
5. Використані пробірки з-під зразків зі згустками крові і т. п. (закриті кришками) слід помістити у водонепроникний контейнер для автоклавування та/або спалювання.
6. Для чищення бризок і проток має бути в наявності відповідний дезінфікуючий засіб

Використання центрифуг
1. Необхідною умовою забезпечення мікробіологічної безпеки при використанні лабораторних центрифуг є їх задовільні механічні характеристики.
2. Центрифуги повинні використовуватися у відповідності з інструкціями заводу-виробника.
3. Центрифуги повинні встановлюватися на такому рівні, щоб оператор міг бачити внутрішню частину камери і правильно встановити цапфи і стакани.
4. Центрифужні пробірки і контейнери зі зразками, що підлягають центрифугированию, повинні бути виготовлені з товстого скла або пластмаси і до використання перевірені на наявність дефектів.
5. Пробірки і контейнери зі зразками для центрифугування завжди повинні бути щільно зачинені (по можливості, загвинчуються кришками).
6. Стакан центрифуги слід завантажувати, врівноважувати, герметично закривати і розвантажувати в боксі біологічної безпеки.
7. Центрифужні стакани і цапфи повинні бути спарені по вазі і відповідним чином врівноважені разом із встановленими пробірками.
8. Відстань між рівнем рідини у центрифужной пробірці до її краю, повинно бути зазначено в інструкціях заводу-виробника.
9. Для балансування порожніх склянок слід використовувати дистильовану воду або алкоголь (70-відсотковий пропанол). Не слід застосовувати сольові або гипохлоритные розчини, так як вони викликають корозію металів.
10. Для роботи з мікроорганізмами груп ризику 3 і 4 слід використовувати центрифужні стакани з герметично закриваються кришками («чашками безпеки»).
11. При використанні роторів центрифуги з кутовими насадками слід звернути особливу увагу на те, щоб не перевантажити пробірку, так як в цьому випадку вона може протекти.
12. Внутрішню поверхню центрифужной камери слід щодня оглядати для виявлення плям або бруду на рівні ротора. При наявності таких зареєстровані результати центрифугування слід переглянути.
13. Центрифужні ротори і стакани слід щодня оглядати на наявність можливої корозії і тріщин.
14. Стакани, ротори і центрифужні ємності слід деконтаминировать після кожного використання.
15. Після використання стакани слід зберігати у вертикальному положенні, з тим щоб використана для балансування рідина могла повністю витекти.
16. При центрифугуванні можуть утворюватися зважені в повітрі частки інфекційних матеріалів. Ці частинки переміщуються занадто швидко і не можуть бути віднесені потоком повітря, якщо центрифуга поміщена в звичайний бокс біологічної безпеки класу I або II класу з відкритою передньою частиною. Запобігти поширенню аерозолів можна, помістивши центрифугу в бокс біологічної безпеки класу III. Тим не менш, правильні методи центрифугування і щільно закриті пробірки забезпечують достатній захист від інфекційних аерозолів і поширення частинок.

Використання гомогенизаторов, шейкерів,
міксерів та ультразвукових подрібнювачів (соникаторов)
1. Домашні (кухонні) гомогенізатори не повинні використовуватися в лабораторіях, так як вони можуть протікати або утворювати аерозолі. Більш безпечними є лабораторні міксери і лопаткові гомогенізатори типу «стомакер».
2. Кришки, чашки і судини повинні бути міцними, в хорошому стані, не мати тріщин або інших дефектів. Кришки повинні бути добре пригнані, а прокладки повинні бути у хорошому стані.
3. У процесі роботи гомогенизаторов, шейкерів і соникаторов в посудині створюється тиск. Аерозолі, що містять інфекційні матеріали можуть проникати назовні через щілини між кришкою і посудиною. У цих цілях рекомендується використовувати пластмасові, зокрема фторопластові, судини, так як скляні можуть розбитися і викликати витік інфекційного матеріалу і нанесення ран оператору.
4. Під час роботи гомогенізатори, шейкери і соникаторы повинні накриватися міцними пластмасовими прозорими екранами, які після використання слід дезінфікувати. По можливості, з цими апаратами слід працювати в боксах біологічної безпеки, накривши їх пластмасовими екранами.
5. По закінченні операції контейнери слід відкривати в боксі біологічної безпеки.
6. Для операторів, що працюють з соникаторами, має бути передбачений захист органів слуху.

Використання подрібнювачів тканин
1. Скляні подрібнювачі слід загортати в абсорбуючі матеріали і працювати з ними в рукавичках. Більш безпечними є пластмасові (фторопластові) подрібнювачі.
2. Працювати з подрібнювачами тканин і відкривати їх слід у боксі біологічної безпеки.

Заходи безпеки та використання холодильників і морозильних камер
1. Холодильники, низькотемпературні холодильні камери та камери з сухим льодом слід періодично розморожувати і чистити, видаляючи при цьому будь-які розбилися при зберіганні ампули, пробірки і т. д. Під час чищення слід надягати міцні гумові рукавички і захищати обличчя. Після чищення внутрішню поверхню камери слід продезінфікувати.
2. Всі зберігаються в холодильнику контейнери тощо повинні мати чітке маркування із зазначенням наукового найменування вмісту, дати приміщення та прізвища особи, що помістив матеріал на зберігання. Матеріали без маркування та із закінченим терміном придатності повинні бути оброблені в автоклаві і видалені.
3. Слід вести інвентарний перелік вмісту холодильних і морозильних камер.
4. Вогненебезпечні рідини не повинні зберігатися в холодильних і морозильних камерах, якщо тільки такі камери не є вибухобезпечними. На дверцята холодильної камери необхідно прикріпити відповідні інструкції.

Розкриття ампул з ліофілізованим
інфекційним матеріалом
При розкритті ампул з ліофілізованим матеріалом слід проявляти обережність, оскільки тиск всередині ампули є зниженим і в результаті різкого напору повітря деяка частина міститься в ампулі матеріалу може потрапити в атмосферу. Ампули слід відкривати в боксі біологічної безпеки.

Для розкриття ампул рекомендується наступна процедура:
1. Спочатку деконтаминируйте зовнішню поверхню ампули.
2. Відпиляєте на ампулі приблизно в середині того місця, де знаходиться ватна пробка.
3. Перш ніж зламати ампулу в місці надпила, для захисту рук оберніть ампулу ватою, змоченою спиртом.
4. Акуратно відламайте верхню частину ампули і звертайтеся з нею як з контаминированным матеріалом.
5. Якщо ватна пробка все ще знаходиться над вмістом ампули, видаліть її стерильним пінцетом.
6. Повільно додайте в ампулу рідина для ресуспендирования, щоб уникнути утворення піни.

Зберігання ампул, які містять інфекційні матеріали
Ампули, що містять інфекційні матеріали, ніколи не слід занурювати в рідкий азот, так як ампули з тріщинами або погано ампули можуть зруйнуватися або вибухнути в момент вилучення. Якщо потрібно дуже низька температура, то ампули слід зберігати в газоподібному середовищі над рідким азотом. В іншому випадку, інфекційні матеріали повинні зберігатися в механічних низькотемпературних камерах або на сухому льоду. При витяганні ампул з місць зберігання лабораторний персонал повинен одягати засоби захисту очей і рук. Після вилучення зберігалися таким чином ампул їх зовнішні поверхні слід дезінфікувати.

Стандартні заходи безпеки при роботі з кров'ю,
іншими рідинами організму, тканинами і екскрементами
Стандартні запобіжні заходи (які включають «загальні заходи») призначені для зменшення ризику передачі мікроорганізмів як від відомих, так і від невідомих джерел інфекції.

Паркан, маркування і транспортування зразків
1. Завжди слід дотримуватись стандартних запобіжних заходів; для усіх процедур необхідно надягати рукавички.
2. Забір крові від пацієнтів і тварин повинен проводитися підготовленим персоналом.
3. Для флеботомии звичайні голки і шприци слід замінити на одноразові безпечні вакуумні пристрої, які дають можливість забирати кров безпосередньо в закупорені пробірки для транспортування та/або культури, і відразу ж нейтралізувати голку після використання.
4. Пробірки слід поміщати в спеціальні контейнери для транспортування в лабораторію і всередині лабораторних приміщень. Бланки заявок повинні вміщуватися в окремі непромокальні пакети або конверти.
5. Персонал, який бере зразки, не повинен відкривати ці пакети.

Відкриття пробірок зі зразками і перевірка вмісту
1. Пробірки із зразками слід відкривати в боксі біологічної безпеки.
2. Слід надягати рукавички. Рекомендується також використовувати засоби захисту очей та слизових оболонок (окуляри або лицеві щитки).
3. Захисний одяг слід доповнювати пластиковим фартухом.
4. Пробку слід захоплювати через лист паперу або марлю, з тим щоб запобігти розбризкуванню.

Скло і «гострі предмети»
1. По можливості, завжди слід замінювати скляні предмети пластмасовими. Допускається використання тільки толстого і міцного лабораторного (боросилікатного) скла; будь-який предмет з щербинами або тріщинами слід викинути.
2. Не допускається використання шприців для підшкірних ін'єкцій як піпеток (див. також міститься в даній главі розділ про запобігання ін'єкції інфікованих матеріалів)

Плівки і мазки для мікроскопії
Фіксування та фарбування зразків крові, мокротиння і фекалій для мікроскопії не обов'язково вбиває всі мікроорганізми або віруси в мазку. Тому такі предмети слід брати пінцетом, який повинен зберігатися окремо і деконтаминироваться та/або оброблятися в автоклаві до його видалення.

Автоматизоване обладнання
(ультразвукові подрібнювачі, вихрові міксери)
1. Для запобігання диспергування крапель і аерозолів обладнання повинно бути закритого типу.
2. Чутки матеріал слід збирати в посуд, що закривається для подальшої обробки в автоклаві та/або видалення.
3. В кінці кожного сеансу роботи обладнання слід продезінфікувати у відповідності з інструкціями заводів-виготовлювачів.

Тканини
1. Слід використовувати формалиновый фіксаж.
2. Слід уникати секціонування в замороженому вигляді. При необхідності, кріостат слід закрити екраном, а оператору слід надіти лицьовій щиток.

Для деконтамінації інструмент слід нагріти, принаймні, до температури 20 °C.

Деконтамінація
Для деконтамінації рекомендується використовувати гіпохлорити і високоактивні дезінфікуючі засоби. Свіжоприготовані розчини гіпохлориту повинні містити вільний хлор у кількості 1 г/л для загального застосування і 5 г/л для що пролилася крові. Для деконтамінації поверхонь можна використовувати глутаральдегид.

Заходи безпеки при роботі з матеріалами,
які можуть містити пріони
Пріони (звані також «повільними вірусами») асоціюються з трансмісивними губкообразными энцефалопатиями (ТГЭ), а саме, з хворобу Крейцфельда-Якоба (БКЯ; включаючи нову варіантну форму), синдромом ГерштманнаШтраусслера-Шейнкера, летальною спадкової инсомнией і куру у людини; почесухой у овець і кіз, губкообразной енцефалопатією великої рогатої худоби (ГЭКРС) та іншими трансмісивними энцефалопатиями у оленів, лосів і норок.
Хоча БКЯ і була передана людині, тим не менше доведених випадків інфікування будь-яким з цих агентів в лабораторіях немає. Разом з тим, при роботі з матеріалами, взятими у інфікованих або потенційно інфікованих людей і тварин, слід дотримуватися певних запобіжних заходів.
Вибір рівня біологічної безпеки для роботи з матеріалами, пов'язаними з ТГЭ, буде залежати від характеру агента і досліджуваних зразків, і повинен проводитися консультації з національними органами. Найбільші концентрації пріонів виявлені в тканинах центральної нервової системи. Дослідження на тварин свідчать про те, що високі концентрації пріонів можуть також міститися в селезінці, вилочкової залозі, лімфатичних вузлах і легенях. Останні дослідження показали, що пріони, що містяться в тканинах мовних і скелетних м'язів, також можуть становити потенційний ризик інфекції.

Оскільки повної інактивації пріонів домогтися важко, важливо звернути особливу увагу на те, щоб кожен раз, коли це можливо, використовувався одноразовий інструмент і одноразові захисні покриття для робочої поверхні боксу біологічної безпеки.
Головним заходом безпеки є запобігання поглинання контамінованих матеріалів або проколів шкіри лабораторного працівника. Нижче наводяться додаткові заходи обережності, так як в ході звичайних процедур лабораторної дезінфекції та стерилізації інфекційні агенти не гинуть.
1. Настійно рекомендується користуватися індивідуальним обладнанням, тобто таким, яке не використовується спільно з іншими лабораторіями.
2. Слід надягати одноразову лабораторну захисний одяг (халати і фартухи), а також рукавички (патології повинні носити сталеві сітчасті рукавички).
3. Настійно рекомендується використовувати одноразовий пластмасовий посуд, поводитися з нею як з сухими відходами і видаляти її як сухі відходи.
4. У зв'язку з проблемами дезінфекції не слід використовувати пристрої для обробки тканин. Замість них слід використовувати чаші і банки (пластмасові).
5. Всі маніпуляції повинні проводитися в боксах біологічної безпеки.
6. Особливу обережність необхідно проявляти для запобігання утворення аерозолів та їх поглинання, а також порізів і проколів шкіри.
7. Оброблені формаліном тканини слід вважати інфікованими навіть після тривалої дії формаліну.
8. Гістологічні зразки, що містять пріони, значною мірою інактивуються після впливу на них 96-ною мурашиною кислотою протягом однієї години.
9. Лабораторні відходи, у тому числі одноразові рукавички, халати і фартухи, слід обробляти в автоклаві з використанням паростерилизатора при температурі 134-137 °C протягом одного циклу тривалістю 18 хвилин або шести послідовних циклів тривалістю 6 хвилин, після чого
спалити.
10. Інструменти багаторазового користування, включаючи сталеві сітчасті рукавички, слід зібрати для подальшої деконтамінації.
11. Інфіковані рідкі відходи, контаміновані пріонами, слід обробити гіпохлоритом натрію, що містить 20 г/л вільного хлору (2%) (кінцева концентрація), протягом однієї години.
12. Метод випаровування параформальдегіду не дає можливості зменшити титри пріонів, до того ж, пріони резистентні до ультрафіолетового опромінення.
Тим не менш, бокси в будь-якому випадку необхідно деконтаминировать з допомогою стандартних методів (тобто з допомогою газоподібного формальдегіду) для інактивації інших можливих агентів.
13. Контаміновані пріонами бокси біологічної безпеки та інші поверхні можна деконтаминировать гіпохлоритом натрію, що містить 20 г/л (2%) вільного хлору, протягом однієї години.
14. Високоефективні фільтри тонкого очищення (HEPA) після видалення слід спалювати при температурі не менше 1000 °C. До спалювання рекомендується приймати такі додаткові заходи:
a. перш ніж зняти фільтр, побризкати на ту сторону, яка піддавалася впливу інфекційних матеріалів, лак для волосся,
b. під час зняття фільтра загорнути його в мішок і
c. виймати фільтр з робочої камери таким чином, щоб не контаминировать недоступний відсік боксу.
15. Інструменти слід замочити в гипохлорите натрію, що містить 20 г/л (2%) вільного хлору, протягом однієї години і потім до автоклавиривания добре промити водою.
16. Інструменти, які не можна автоклавировать, можна чистити, протираючи кілька разів протягом однієї години гіпохлоритом натрію, що містить 20 г/л (2%) вільного хлору. Після цього необхідно добре промити інструмент, щоб видалити залишки гіпохлориту натрію.