Методы соблюдения биологической безопасности в лабораторных условиях

Безопасная работа с образцами в лаборатории
Неправильные сбор, транспортировка и обращение с образцами в лаборатории сопряжены с риском инфицирования человека, который этим занимается.

Контейнеры для образцов
Контейнеры для образцов могут быть стеклянными, но предпочтительно, чтобы они были пластмассовыми. Они должны быть прочными и не иметь протечек при правильно установленной крышке. Никакой материал не должен оставаться на наружной поверхности контейнера. Контейнер должен быть надлежащим образом помечен для облегчения идентификации. Запрос на образец или формы спецификации не должны оборачиваться вокруг контейнеров; их следует поместить в отдельные, предпочтительно водонепроницаемые конверты.

Транспортировка образцов внутри учреждения
Для предотвращения случайной протечки или проливания следует использовать вторичный контейнер, например ящик с подставками, с тем чтобы контейнеры не могли опрокинуться. Вторичный контейнер может быть металлическим или пластмассовым, не портящимся в автоклаве и резистентным к действию химических дезинфицирующих средств. Желательно, чтобы между крышкой и корпусом была уплотнительная прокладка. Такие контейнеры следует регулярно деконтаминировать.

Получение образцов
Лаборатории, которые получают большое количество образцов, должны выделить специальное помещение или место для этой цели.

Открытие упаковки
Персонал, который получает и распаковывает образцы, должен быть ознакомлен со связанными с этим опасностями и пройти специальную подготовку по стандартным мерам предосторожности (2), особенно в отношении разбившихся или протекающих контейнеров. Первичные контейнеры с образцами должны открываться в боксе биологической безопасности. Должны быть в наличии дезинфицирующие средства.

Использование пипеток и пипетирующих средств
1. Пипетирующие средства должны использоваться всегда. Пипетирование ртом должно быть запрещено.
2. Пипетки должны иметь ватные пробки, чтобы уменьшить контаминацию пипетирующих средств.
3. Никогда не следует продувать воздух через жидкость, содержащую инфекционные агенты.
4. Инфекционные материалы не следует смешивать попеременным всасыванием и сливом через пипетку.
5. Нельзя форсировать слив жидкости из пипеток.
6. Предпочтительно использовать пипетки с двумя крайними отметками, так как они не требуют слива последней капли.
7. Контаминированные пипетки следует полностью погрузить в соответствующее дезинфицирующее средство, содержащееся в небьющемся контейнере. Прежде чем удалить, их следует оставить на достаточно продолжительное время в дезинфицирующем средстве.
8. Контейнер для удаления пипеток должен быть помещен внутрь бокса биологической безопасности, а не находиться за его пределами.
9. Шприцы с иглами для подкожных инъекций не должны использоваться для пипетирования.
10. Следует использовать специальные устройства для открывания флаконов с мембранными крышками, которые позволяют использовать пипетки и избегать необходимости использовать шприцы с иглами для подкожных инъекций.
11. Для того, чтобы избежать разбрызгивания упавших из пипетки капель инфекционного материала, следует положить абсорбирующий материал на рабочую поверхность; после использования такой материал следует удалять как инфекционные отходы.

Предотвращение распространения инфекционных материалов
1. Чтобы избежать преждевременной потери своего груза, микробиологические петли для пересева должны иметь диаметр 2-3 мм и не иметь разрыва. Для сведения к минимуму вибрации длина плеча должна быть не более 6 см.
2. Во избежание опасности разбрызгивания инфекционного материала в открытом пламени бунзеновской горелки для стерилизации петель для пересева следует использовать закрытый электрический микросжигатель. Предпочтительнее пользоваться одноразовыми петлями для пересева, которые не нуждаются в стерилизации.
3. Следует проявлять осторожность при сушке образцов мокроты, чтобы избежать образования аэрозолей.
4. Отработанные образцы и культуры для автоклавирования и/или удаления помещаются в непроницаемые контейнеры, например, в лабораторные мусорные мешки. Прежде чем выбрасывать такие мешки, следует тщательно перевязать их, например «автоклавной» лентой.
5. В конце каждого периода работы рабочие зоны следует деконтаминировать соответствующим дезинфицирующим средством.

Использование боксов биологической безопасности
1. Правила и ограничения использования боксов должны быть объяснены всем потенциальным пользователям со ссылкой на национальные стандарты и соответствующую литературу. Персоналу необходимо раздать письменные протоколы или руководства по безопасности или эксплуатации. В частности, персонал должен четко понимать, что бокс не защищает от проливания, боя посуды или плохих методов работы.
2. Бокс можно использовать только при условии, что он находится в исправном
состоянии.
3. Стеклянную смотровую панель нельзя открывать во время использования бокса.
4. Следует держать минимум аппаратуры и материалов в боксе. Нельзя перекрывать циркуляцию воздуха у заднего отсека.
5. В боксе нельзя использовать бунзеновские горелки. Выделяемое ими тепло может нарушить воздушный поток и повредить фильтры. Допускается использование электрического микросжигателя, но лучше пользоваться стерильными одноразовыми петлями для пересева.
6. Все работы должны проводиться на средней или задней части рабочей поверхности и должны быть видимыми через смотровую панель.
7. Следует свести к минимуму перемещения позади оператора.
8. Оператору не следует нарушать воздушный поток, неоднократно вынимая и снова вводя руки в бокс.
9. Ни одна решетка не должна блокироваться записями, пипетками или иными материалами, так как это нарушает воздушный поток и может вызвать контаминацию материала и оператора.
10. Поверхность бокса биологической безопасности следует протирать надлежащим дезинфицирующим средством по завершении работы и в конце дня.
11. Вентилятор бокса должен работать, по крайней мере, в течение 5 минут до начала работы и после завершения работы в боксе.
12. Документы никогда не следует помещать внутрь боксов биологической безопасности.

Предотвращение попадания инфекционных материалов
в организм и контакта с кожей и глазами
1. Крупные частицы и капли (диаметром >5 мкм), образующиеся во время микробиологических манипуляций, быстро оседают на плоские поверхности и руки оператора. Для этого следует надевать перчатки одноразового использования. Работающим в лаборатории следует избегать прикосновений руками ко рту, глазам и лицу.
2. Продукты и напитки не следует употреблять или хранить в лаборатории.
3. В лаборатории не следует брать в рот никакие предметы – ручки, карандаши, жевательную резинку.
4. В лаборатории нельзя пользоваться косметикой.
5. Лицо, глаза и рот должны быть закрыты экраном или иным образом защищены во время любой операции, которая может привести к образованию брызг потенциально инфекционных материалов.

Предотвращение инъекции инфекционных материалов
1. Случайной инокуляции в результате травмы, нанесенной разбитой или треснувшей стеклянной посудой, можно избежать путем тщательного соблюдения правильной практики и процедур. Стеклянную посуду, по возможности, следует заменить на пластмассовую.
2. Случайное инфицирование может произойти в результате травмы от укола, например иглами для подкожного введения (стержневыми иглами), стеклянными пастеровскими пипетками или разбитым стеклом.
3. Случаи травматизма от стержневых игл можно сократить посредством: (а) сведения к минимуму использования шприцев и игл (например, для открывания флаконов и бутылок с мембранными крышками имеются простые приспособления, в результате чего вместо шприцев и игл можно использовать пипетки); или
(b) использования — если шприцы и иглы все же необходимы — специальных устройств для предохранения от укола.
4. Иглы никогда не следует закрывать колпачками. Предметы одноразового пользования следует выбрасывать в стойкие к прокалыванию прочные контейнеры с крышками.
5. Стеклянные пипетки следует заменить пластмассовыми пастеровскими пипетками.

Сепарирование сыворотки
1. Эту работу могут выполнять только подготовленные сотрудники.
2. Следует надеть перчатки, защитить глаза и слизистые оболочки.
3. Брызг и аэрозолей можно избежать или свести их к минимуму только с помощью правильных методов лабораторной работы. Кровь и сыворотку следует аккуратно пипетировать, но не сливать. Пипетирование ртом должно быть строго запрещено.
4. После использования пипеток их следует полностью погрузить в соответствующее дезинфицирующее вещество. Они должны оставаться погруженными в это вещество в течение нужного времени, после чего их можно выбросить или вымыть и простерилизовать для повторного использования.
5. Использованные пробирки из-под образцов со сгустками крови и т.п. (закрытые крышками) следует поместить в водонепроницаемый контейнер для автоклавирования и/или сжигания.
6. Для чистки брызг и проливов должно быть в наличии соответствующее дезинфицирующее средство

Использование центрифуг
1. Необходимым условием обеспечения микробиологической безопасности при использовании лабораторных центрифуг являются их удовлетворительные механические характеристики.
2. Центрифуги должны использоваться в соответствии с инструкциями завода-изготовителя.
3. Центрифуги должны устанавливаться на таком уровне, чтобы оператор мог видеть внутреннюю часть камеры и правильно установить цапфы и стаканы.
4. Центрифужные пробирки и контейнеры с образцами, подлежащие центрифугированию, должны быть изготовлены из толстого стекла или пластмассы и до использования проверены на наличие дефектов.
5. Пробирки и контейнеры с образцами для центрифугирования всегда должны быть плотно закрыты (по возможности, завинчивающимися крышками).
6. Стакан центрифуги следует загружать, уравновешивать, герметично закрывать и разгружать в боксе биологической безопасности.
7. Центрифужные стаканы и цапфы должны быть спарены по весу и соответствующим образом уравновешены вместе с установленными пробирками.
8. Расстояние между уровнем жидкости в центрифужной пробирке до ее края, должно быть указано в инструкциях завода-изготовителя.
9. Для балансировки порожних стаканов следует использовать дистиллированную воду или алкоголь (70-процентный пропанол). Не следует применять солевые или гипохлоритные растворы, так как они вызывают коррозию металлов.
10. Для работы с микроорганизмами групп риска 3 и 4 следует использовать центрифужные стаканы с герметично закрывающимися крышками («чашками безопасности»).
11. При использовании роторов центрифуги с угловыми насадками следует обратить особое внимание на то, чтобы не перегрузить пробирку, так как в этом случае она может протечь.
12. Внутреннюю поверхность центрифужной камеры следует ежедневно осматривать для выявления пятен или грязи на уровне ротора. При наличии таковых зарегистрированные результаты центрифугирования следует пересмотреть.
13. Центрифужные роторы и стаканы следует ежедневно осматривать на наличие возможной коррозии и трещин.
14. Стаканы, роторы и центрифужные емкости следует деконтаминировать после каждого использования.
15. После использования стаканы следует хранить в вертикальном положении, с тем чтобы использованная для балансировки жидкость могла полностью вытечь.
16. При центрифугировании могут образовываться взвешенные в воздухе частицы инфекционных материалов. Эти частицы перемещаются слишком быстро и не могут быть унесены потоком воздуха, если центрифуга помещена в обычный бокс биологической безопасности класса I или класса II с открытой передней частью. Предотвратить распространение аэрозолей можно, поместив центрифугу в бокс биологической безопасности класса III. Тем не менее, правильные методы центрифугирования и плотно закрытые пробирки обеспечивают достаточную защиту от инфекционных аэрозолей и распространения частиц.

Использование гомогенизаторов, шейкеров,
миксеров и ультразвуковых измельчителей (соникаторов)
1. Домашние (кухонные) гомогенизаторы не должны использоваться в лабораториях, так как они могут протекать или образовывать аэрозоли. Более безопасными являются лабораторные миксеры и лопаточные гомогенизаторы типа «стомакер».
2. Крышки, чашки и сосуды должны быть прочными, в хорошем состоянии, не иметь трещин или других дефектов. Крышки должны быть хорошо пригнаны, а прокладки должны быть в хорошем состоянии.
3. В процессе работы гомогенизаторов, шейкеров и соникаторов в сосуде создается давление. Аэрозоли, содержащие инфекционные материалы, могут проникать наружу через щели между крышкой и сосудом. В этих целях рекомендуется использовать пластмассовые, в частности фторопластовые, сосуды, так как стеклянные могут разбиться и вызвать утечку инфекционного материала и нанесение ран оператору.
4. Во время работы гомогенизаторы, шейкеры и соникаторы должны накрываться прочными пластмассовыми прозрачными экранами, которые после использования следует дезинфицировать. По возможности, с этими аппаратами следует работать в боксах биологической безопасности, накрыв их пластмассовыми экранами.
5. По окончании операции контейнеры следует открывать в боксе биологической безопасности.
6. Для операторов, работающих с соникаторами, должна быть предусмотрена защита органов слуха.

Использование измельчителей тканей
1. Стеклянные измельчители следует заворачивать в абсорбирующие материалы и работать с ними в перчатках. Более безопасными являются пластмассовые (фторопластовые) измельчители.
2. Работать с измельчителями тканей и открывать их следует в боксе биологической безопасности.

Меры предосторожности и использование холодильников и морозильных камер
1. Холодильники, низкотемпературные холодильные камеры и камеры с сухим льдом следует периодически размораживать и чистить, удаляя при этом любые разбившиеся при хранении ампулы, пробирки и т.д. Во время чистки следует надевать прочные резиновые перчатки и защищать лицо. После чистки внутреннюю поверхность камеры следует продезинфицировать.
2. Все хранящиеся в холодильнике контейнеры и т.п. должны иметь четкую маркировку с указанием научного наименования содержимого, даты помещения и фамилии лица, поместившего материал на хранение. Материалы без маркировки и с истекшим сроком годности должны быть обработаны в автоклаве и удалены.
3. Следует вести инвентарный перечень содержимого холодильных и морозильных камер.
4. Огнеопасные жидкости не должны храниться в холодильных и морозильных камерах, если только такие камеры не являются взрывобезопасными. На дверцы холодильной камеры необходимо прикрепить соответствующие инструкции.

Вскрытие ампул с лиофилизированным
инфекционным материалом
При вскрытии ампул с лиофилизированным материалом следует проявлять осторожность, так как давление внутри ампулы является пониженным и в результате резкого напора воздуха некоторая часть содержащегося в ампуле материала может попасть в атмосферу. Ампулы следует открывать в боксе биологической безопасности.

Для вскрытия ампул рекомендуется следующая процедура:
1. Сначала деконтаминируйте наружную поверхность ампулы.
2. Сделайте надпил на ампуле приблизительно в середине того места, где находится ватная пробка.
3. Прежде чем сломать ампулу в месте надпила, для защиты рук оберните ампулу ватой, смоченной спиртом.
4. Аккуратно отломите верхнюю часть ампулы и обращайтесь с ней как с контаминированным материалом.
5. Если ватная пробка все еще находится над содержимым ампулы, удалите ее стерильным пинцетом.
6. Медленно добавьте в ампулу жидкость для ресуспендирования, чтобы избежать образования пены.

Хранение ампул, содержащих инфекционные материалы
Ампулы, содержащие инфекционные материалы, никогда не следует погружать в жидкий азот, так как ампулы с трещинами или плохо запаянные ампулы могут разрушиться или взорваться в момент извлечения. Если требуется очень низкая температура, то ампулы следует хранить в газообразной среде над жидким азотом. В противном случае, инфекционные материалы должны храниться в механических низкотемпературных камерах или на сухом льду. При извлечении ампул из мест хранения лабораторный персонал должен надевать средства защиты глаз и рук. После извлечения хранившихся таким образом ампул их наружные поверхности следует дезинфицировать.

Стандартные меры предосторожности при работе с кровью,
другими жидкостями организма, тканями и экскрементами
Стандартные меры предосторожности (которые включают «общие меры предосторожности») предназначены для уменьшения риска передачи микроорганизмов как от известных, так и от неизвестных источников инфекции.

Забор, маркировка и транспортировка образцов
1. Всегда следует соблюдать стандартные меры предосторожности; для всех процедур необходимо надевать перчатки.
2. Забор крови от пациентов и животных должен производиться подготовленным персоналом.
3. Для флеботомии обычные иглы и шприцы следует заменить на одноразовые безопасные вакуумные устройства, которые дают возможность забирать кровь непосредственно в закупоренные пробирки для транспортировки и/или культуры, и сразу же нейтрализовать иглу после использования.
4. Пробирки следует помещать в специальные контейнеры для транспортировки в лабораторию и внутри лабораторных помещений. Бланки заявок должны помещаться в отдельные непромокаемые пакеты или конверты.
5. Персонал, принимающий образцы, не должен открывать эти пакеты.

Открытие пробирок с образцами и проверка содержимого
1. Пробирки с образцами следует открывать в боксе биологической безопасности.
2. Следует надевать перчатки. Рекомендуется также использовать средства защиты глаз и слизистых оболочек (очки или лицевые щитки).
3. Защитную одежду следует дополнять пластиковым фартуком.
4. Пробку следует захватывать через лист бумаги или марлю, с тем чтобы предотвратить разбрызгивание.

Стекло и «острые предметы»
1. По возможности, всегда следует заменять стеклянные предметы пластмассовыми. Допускается использование только толстого и прочного лабораторного (боросиликатного) стекла; любой предмет со щербинами или трещинами следует выбросить.
2. Не допускается использование шприцев для подкожных инъекций в качестве пипеток (см. также содержащийся в данной главе раздел о предотвращении инъекции инфицированных материалов)

Пленки и мазки для микроскопии
Фиксирование и окрашивание образцов крови, мокроты и фекалий для микроскопии не обязательно убивает все микроорганизмы или вирусы в мазке. Поэтому такие предметы следует брать пинцетом, который должен храниться отдельно и деконтаминироваться и/или обрабатываться в автоклаве до его удаления.

Автоматизированное оборудование
(ультразвуковые измельчители, вихревые миксеры)
1. Для предотвращения диспергирования капель и аэрозолей оборудование должно быть закрытого типа.
2. Просочившийся материал следует собирать в закрывающуюся посуду для последующей обработки в автоклаве и/или удаления.
3. В конце каждого сеанса работы оборудование следует продезинфицировать в соответствии с инструкциями заводов-изготовителей.

Ткани
1. Следует использовать формалиновый фиксаж.
2. Следует избегать секционирования в замороженном виде. При необходимости, криостат следует закрыть экраном, а оператору следует надеть лицевой щиток.

Для деконтаминации инструмент следует нагреть, по крайней мере, до температуры 20 °C.

Деконтаминация
Для деконтаминации рекомендуется использовать гипохлориты и высокоактивные дезинфицирующие средства. Свежеприготовленные растворы гипохлорита должны содержать свободный хлор в количестве 1 г/л для общего применения и 5 г/л для пролившейся крови. Для деконтаминации поверхностей можно использовать глутаральдегид.

Меры предосторожности при работе с материалами,
которые могут содержать прионы
Прионы (называемые также «медленными вирусами») ассоциируются с трансмиссивными губкообразными энцефалопатиями (ТГЭ), а именно, с болезнью Крейцфельда-Якоба (БКЯ; включая новую вариантную форму), синдромом ГерштманнаШтраусслера-Шейнкера, летальной наследственной инсомнией и куру у человека; почесухой у овец и коз, губкообразной энцефалопатией крупного рогатого скота (ГЭКРС) и другими трансмиссивными энцефалопатиями у оленей, лосей и норок.
Хотя БКЯ и была передана человеку, тем не менее доказанных случаев инфицирования любым из этих агентов в лабораториях нет. Вместе с тем, при работе с материалами, взятыми у инфицированных или потенциально инфицированных людей и животных, следует соблюдать определенные меры предосторожности.
Выбор уровня биологической безопасности для работы с материалами, связанными с ТГЭ, будет зависеть от характера агента и изучаемых образцов, и должен производиться в консультации с национальными органами. Наибольшие концентрации прионов обнаружены в тканях центральной нервной системы. Исследования на животных свидетельствуют о том, что высокие концентрации прионов могут также содержаться в селезенке, вилочковой железе, лимфатических узлах и легких. Последние исследования показали, что прионы, содержащиеся в тканях язычных и скелетных мышц, также могут представлять потенциальный риск инфекции.

Поскольку полной инактивации прионов добиться трудно, важно обратить особое внимание на то, чтобы каждый раз, когда это возможно, использовался одноразовый инструмент и одноразовые защитные покрытия для рабочей поверхности бокса биологической безопасности.
Главной мерой предосторожности является предотвращение поглощения контаминированных материалов или проколов кожи лабораторного работника. Ниже приводятся дополнительные меры предосторожности, так как в ходе обычных процедур лабораторной дезинфекции и стерилизации инфекционные агенты не погибают.
1. Настоятельно рекомендуется пользоваться индивидуальным оборудованием, то есть таким, которое не используется совместно с другими лабораториями.
2. Следует надевать одноразовую лабораторную защитную одежду (халаты и передники), а также перчатки (патологи должны носить прорезиненные стальные сетчатые перчатки).
3. Настоятельно рекомендуется использовать одноразовую пластмассовую посуду, обращаться с ней как с сухими отходами и удалять ее как сухие отходы.
4. В связи с проблемами дезинфекции не следует использовать устройства для обработки тканей. Вместо них следует использовать чаши и банки (пластмассовые).
5. Все манипуляции должны производиться в боксах биологической безопасности.
6. Особую осторожность необходимо проявлять для предотвращения образования аэрозолей и их поглощения, а также порезов и проколов кожи.
7. Обработанные формалином ткани следует считать инфицированными даже после продолжительного воздействия формалина.
8. Гистологические образцы, содержащие прионы, в значительной степени инактивируются после воздействия на них 96-процентной муравьиной кислотой в течение одного часа.
9. Лабораторные отходы, в том числе одноразовые перчатки, халаты и передники, следует обрабатывать в автоклаве с использованием паростерилизатора при температуре 134–137 °C в течение одного цикла продолжительностью 18 минут или шести последовательных циклов продолжительностью 6 минут, после чего
сжечь.
10. Инструменты многоразового пользования, включая стальные сетчатые перчатки, следует собирать для последующей деконтаминации.
11. Инфицированные жидкие отходы, контаминированные прионами, следует обработать гипохлоритом натрия, содержащим 20 г/л свободного хлора (2%) (конечная концентрация), в течение одного часа.
12. Метод выпаривания параформальдегида не дает возможности уменьшить титры прионов, к тому же, прионы резистентны к ультрафиолетовому облучению.
Тем не менее, боксы в любом случае необходимо деконтаминировать с помощью стандартных методов (то есть с помощью газообразного формальдегида) для инактивации других возможных агентов.
13. Контаминированные прионами боксы биологической безопасности и другие поверхности можно деконтаминировать гипохлоритом натрия, содержащим 20 г/л (2%) свободного хлора, в течение одного часа.
14. Высокоэффективные фильтры тонкой очистки (HEPA) после удаления следует сжигать при температуре не менее 1000 °C. До сжигания рекомендуется принимать следующие дополнительные меры:
a. прежде чем снять фильтр, побрызгать на ту сторону, которая подвергалась воздействию инфекционных материалов, лак для волос,
b. во время снятия фильтра завернуть его в мешок и
c. вынимать фильтр из рабочей камеры таким образом, чтобы не контаминировать недоступный отсек бокса.
15. Инструменты следует замочить в гипохлорите натрия, содержащем 20 г/л (2%) свободного хлора, в течение одного часа и затем до автоклавиривания хорошо промыть водой.
16. Инструменты, которые нельзя автоклавировать, можно чистить, протирая несколько раз в течение одного часа гипохлоритом натрия, содержащим 20 г/л (2%) свободного хлора. После этого необходимо хорошо промыть инструмент, чтобы удалить остатки гипохлорита натрия.